PCR反應(yīng):
首先,在PCR反應(yīng)管或板中組裝PCR反應(yīng)混合物,包括待檢測(cè)的DNA或RNA模板、引物、熒光標(biāo)記的探針或染料、聚合酶等。
PCR反應(yīng)過(guò)程包括變性、退火和延伸步驟,通過(guò)循環(huán)加熱和降溫來(lái)擴(kuò)增目標(biāo)DNA或RNA序列。
熒光信號(hào)檢測(cè):
在PCR反應(yīng)過(guò)程中,熒光標(biāo)記的探針或染料與目標(biāo)序列結(jié)合,產(chǎn)生熒光信號(hào)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)PCR反應(yīng)管或板中的熒光信號(hào),熒光信號(hào)的強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比。
數(shù)據(jù)采集和分析:
控制系統(tǒng)通過(guò)控制溫度循環(huán)和光學(xué)系統(tǒng),實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中的熒光信號(hào)。
數(shù)據(jù)分析軟件會(huì)記錄并分析熒光信號(hào)的變化,繪制熒光信號(hào)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中目標(biāo)序列的起始數(shù)量。
定量分析:
通過(guò)比較待檢測(cè)樣本的熒光信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)曲線上的對(duì)應(yīng)值,可以確定待檢測(cè)樣本中目標(biāo)序列的起始數(shù)量。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀可以提供定量結(jié)果,通常以基因拷貝數(shù)或相對(duì)表達(dá)量的形式呈現(xiàn)。
結(jié)果輸出:
分析軟件可以將定量結(jié)果輸出到計(jì)算機(jī)或打印機(jī),以便后續(xù)數(shù)據(jù)分析和報(bào)告生成。
結(jié)果通常包括目標(biāo)序列的數(shù)量、PCR曲線、熒光信號(hào)曲線等信息。
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