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試劑與材料準(zhǔn)備:需要準(zhǔn)備微生物基質(zhì)試劑盒(含A液和B液)、接種環(huán)(1μL)、微量移液器和吸頭(2.5μL)等。
樣本要求:待檢樣本必須是經(jīng)培養(yǎng)基分離后的純化菌落。常用的培養(yǎng)基包括哥倫比亞血瓊脂、沙保氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基等。樣本應(yīng)新鮮培養(yǎng),以滿足鑒定準(zhǔn)確性的要求。
樣本前處理:細(xì)菌制備采用直涂法。使用1μL接種環(huán)挑取合適菌落,將微生物菌落涂在靶點(diǎn)中央位置,并攤涂均勻,形成薄層。然后用移液器滴加2μL B液,待其自然干燥后,滴加1.5μL?。烈河诎悬c(diǎn)正中,自然干燥,待測(cè)。操作時(shí)應(yīng)戴無粉手套,避免污染。
上機(jī)檢測(cè):將制備好的靶板放入質(zhì)譜儀中進(jìn)行檢測(cè)。需要注意的是,水分進(jìn)入真空系統(tǒng)可能會(huì)損壞儀器,因此需待靶板完全干燥后,方可將靶板載入真空倉(cāng)。
數(shù)據(jù)采集:在質(zhì)譜儀中,樣品通過有效的電離將不同質(zhì)荷比(m/z)的離子分開形成細(xì)菌特異性的清晰的指紋圖譜。
數(shù)據(jù)分析:通過分析關(guān)鍵的質(zhì)譜峰數(shù)據(jù),與數(shù)據(jù)庫中的已知菌種譜圖進(jìn)行比對(duì),即可快速得到細(xì)菌鑒定結(jié)果。質(zhì)譜儀得到的鑒定結(jié)果在報(bào)告之前,應(yīng)由微生物專業(yè)人員進(jìn)行審核,審核過程中可結(jié)合樣本來源、染色結(jié)果、形態(tài)學(xué)、培養(yǎng)條件等特征對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)判。
結(jié)果報(bào)告:報(bào)告結(jié)果通常包括分值和一致性,需要專業(yè)人員進(jìn)行審核和解釋,以確保結(jié)果的可靠性。
質(zhì)量控制:實(shí)驗(yàn)室需按照MALDI-TOF?。停又圃焐痰耐扑]和相關(guān)管理指南制定質(zhì)控程序,包括儀器校準(zhǔn)、室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。
操作安全:在操作過程中,應(yīng)遵循生物安全要求,特別是在處理高致病性微生物時(shí),應(yīng)采用適當(dāng)?shù)臏缁罘椒?,并在生物安全柜中操作?/p>
特殊情況處理:對(duì)于特殊類型的菌落,如黏液型菌落或干燥型菌落,可能需要特殊的處理方法以提高鑒定效果。
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